本周hzangs在最新文献中选取了10篇分享给大家。第1篇文章研究了细胞外囊泡表面蛋白糖基化对于细胞外囊泡全身分布特点的影响，发现糖基化修饰对于细胞外囊泡远端传播具有重要功能；第2篇文章研究了细胞外囊泡的免疫抑制作用，发现肿瘤来源的细胞外囊泡不仅通过PD-L1直接抑制T细胞功能，同时还会调控免疫抑制细胞实现免疫逃逸；第3篇是综述文章，主要介绍了目前单个细胞外囊泡的分析策略方法。相关文章的原文在周一前会发布到论坛同名贴下，需要的可以到论坛下载
1.Altered biodistribution of deglycosylated extracellular vesicles through enhanced cellular uptake.
通过增强的细胞摄取改变了去糖基化的细胞外囊泡的生物分布。
[J Extracell Vesicles] IF=11 PMID：32082512
摘要：来自癌症的细胞外囊泡（EVs）传递到近端和远端器官。 EV在与细胞相互作用的表面高度糖基化，因此对其特性和生物学功能有影响。癌症中异常糖基化与癌症进展和转移有关。然而，未发现EV表面糖基化的生物学功能。我们首先通过凝集素印迹证明了细胞外囊泡及其起源细胞的差异糖基化谱，以及来自其亲代人类乳腺癌细胞系MDA-MB-231-luc-D3H2LN的脑转移亚系BMD2a的脑转移亚谱的独特糖基化谱。然后，我们研究了表面糖缀合物对EV摄取的作用。荧光标记的BMD2a EV的N和/或O-糖基化去除作用增强了细胞的摄取，这表明表面糖基化对细胞摄取具有抑制作用。静脉内施用给小鼠的糖基化剥夺的BMD2a EV的生物分布在体外使用近红外亲脂性染料进行了进一步分析。注射24小时后，用O-去糖基化酶处理的EV增强了EV向肺的积累，而N-去糖基化并未明显改变生物分布。由于肺是静脉内血液流动的第一器官，因此我们认为，癌症衍生细胞外囊泡的表面糖基化可避免与近端组织的混杂粘附，从而将其传递到远处的器官。
PS：细胞外囊泡表面蛋白具有糖基化修饰，这是已经有很多报道的。但是糖基化修饰的功能研究却不多。这篇文章主要尝试了改变细胞外囊泡表面蛋白的糖基化修饰，研究细胞外囊泡在全身分布的特征变化。这一研究证明糖基化修饰可以避免近端器官对囊泡的摄取，从而促进囊泡向远端器官的传播。
2.The role of extracellular vesicles and PD-L1 in glioblastoma-mediated immunosuppressive monocyte induction.
细胞外囊泡和PD-L1在胶质母细胞瘤介导的免疫抑制单核细胞诱导中的作用。
[Neuro Oncol] IF=10.091 PMID：32080744
摘要：胶质母细胞瘤（GBM）中的免疫抑制是有效免疫治疗的障碍。 GBM衍生的免疫抑制单核细胞对此至关重要。程序性死亡配体1（PD-L1）是一种免疫检查点分子，由GBM细胞和GBM细胞外囊泡（EVs）表达。我们试图确定与EV相关的PD-L1在免疫抑制单核细胞形成中的作用。从健康供体中收集的单核细胞用GBM衍生的EV进行调节，以诱导免疫抑制单核细胞的形成，并通过流式细胞仪对其进行定量。随后将供体匹配的T细胞与EV条件的单核细胞共培养，以评估对T细胞增殖的影响。 PD-L1组成型过表达或shRNA介导的敲低用于确定改变的PD-L1表达的作用。结果显示GBM来源细胞外囊泡与T细胞和单核细胞都相互作用，但不直接抑制T细胞活化。GBM EV会诱导免疫抑制单核细胞，包括髓样抑制细胞（MDSC）和非经典单核细胞（NCM）。 MDSCs和NCMs在体外抑制T细胞增殖，并在GBM中发现相似过程。 EV PD-L1的表达诱导NCM，但不诱导MDSC，并且不影响EV条件的单核细胞对T细胞的抑制作用。以上研究表明，GBM EV介导的免疫抑制是通过诱导免疫抑制单核细胞而不是直接的T细胞抑制而发生的，尽管PD-L1表达对于诱导特定的免疫抑制单核细胞群很重要，但通过EV的免疫抑制信号传导机制很复杂，并且不限于PD-L1。
PS：肿瘤细胞同细胞外囊泡表面的PD-L1介导免疫抑制从而实现免疫逃逸是2019年的重大发现。这篇文章则探讨了细胞外囊泡调控免疫抑制的其他途径，研究发现细胞外囊泡还可以通过诱导免疫抑制细胞实现免疫逃逸。
3.Recent advances in single extracellular vesicle detection methods.
单细胞外囊泡检测方法的最新进展。
[Biosens Bioelectron] IF=9.518 PMID：32093894
摘要：细胞外囊泡（EVs）由多种细胞分泌。它们以在细胞间通讯中的相关作用以及参与不同的病理过程而闻名，使其成为用作诊断和治疗疾病的生物标记物的理想候选者。近年来，完善的液体活检技术以及细胞外囊泡作为生物标志物的检测和利用这一概念受到了前所未有的关注。已经提出了许多快速和精确的EV检测方法，但是，大多数方法是批量检测EV。由于单个细胞外囊泡（SEV）的普遍异质性在疾病进展分析中起着重要作用，因此，为了防止信息丢失，人们越来越重视SEV检测并取得了显著成功。荧光标记，显微成像和微流控芯片等技术已成功用于SEV级别的EV检测。这篇综述总结了SEV检测方法的最新进展，其潜在目标，应用以及对开发新SEV检测策略的未来前景的总结。
PS：就像单细胞分析越来越被人看重一样，由于细胞外囊泡的异质性，单个细胞外囊泡的分析也显得愈发重要。文章综述了目前单个细胞外囊泡分析技术方面的进展。
4.Hepatitis A virus structural protein pX interacts with ALIX and promotes the secretion of virions and foreign proteins through exosome-like vesicles.
甲型肝炎病毒结构蛋白pX与ALIX相互作用，并通过外泌体样小泡促进病毒体和外源蛋白的分泌。
[J Extracell Vesicles] IF=11 PMID：32082513
摘要：甲型肝炎病毒（HAV）是一种经典的非包膜病毒，最近被发现通过劫持运输所需的宿主内体分选复合物（ESCRT）复合物而以准包封形HAV（eHAV）的形式释放。与非包膜病毒体不同，eHAV在HAV衣壳表面含有病毒蛋白pX作为VP1的延伸。以前尚不清楚HAV衣壳如何获得宿主包膜以及pX蛋白是否参与该过程。在这里，我们分析外泌体样细胞外囊泡（EVs）和eHAV的形成中外源蛋白分泌中pX的作用。 pX与eGFP的融合通过指导eGFP进入多囊泡体（MVB）引导eGFP进入外泌体样EV，并且显着增强了凋亡相关基因2相互作用蛋白X（ALIX）的释放。免疫共沉淀（co-IP）证明了pX和ALIX V结构域之间的相互作用。去除pX的C末端部分消除了eHAV释放，并减少了HAV病毒体与ALIX之间的相互作用。最后，仅通过pX的C端一半就足以通过与ALIX相互作用将eGFP加载到EV中。总之，pX的C末端部分对于eHAV的生产很重要，并且可能具有将大量蛋白复合物装载到外泌体样EV中以进行治疗的潜力。
PS：文章研究发现了甲型肝炎病毒pX蛋白可以与ALIX结合，促进病毒体进入外泌体样囊泡中。一方面丰富了我们对甲型肝炎病毒的认识，另一方面也提供了一种潜在促进蛋白分选进入囊泡的策略。感兴趣的可以了解一下。
5.Human umbilical cord mesenchymal stromal cells-derived extracellular vesicles exert potent bone protective effects by CLEC11A-mediated regulation of bone metabolism.
人脐带间充质基质细胞源性囊泡通过CLEC11A介导的骨代谢调节发挥有效的骨保护作用。
[Theranostics] IF=8.063 PMID：32089743
摘要：骨质疏松症和骨质疏松性骨折严重损害老年人的生活质量并导致早期死亡。人脐带间充质基质细胞（MSC）衍生的细胞外囊泡（hucMSC-EV）在组织修复和再生中具有相当大的治疗作用。因此，在本研究中，我们调查了hucMSC-EV对原发性和继发性骨质疏松的影响，并探讨了其潜在机制。分离培养hucMSCs。从hucMSCs的条件培养基中获得EV，并通过透射电子显微镜，动态光散射和Western Blot分析确定。通过使用微型计算机断层扫描，生物力学，组织化学和免疫组织化学以及组织形态分析，评估了hucMSC-EV对小鼠卵巢切除术引起的绝经后骨质疏松症和尾部悬浮液引起的后肢废用性骨质疏松症的影响。在hucMSC-EV和hucMSC之间进行了蛋白质组学分析，以筛选介导hucMSC-EVs功能的候选蛋白。通过使用细胞化学染色和定量实时PCR分析，确定了hucMSC-EVs对骨髓间充质基质细胞（BMSCs）的成骨和成脂分化以及巨噬细胞系RAW264.7的破骨细胞作用的影响。随后，评估了关键蛋白在hucMSC-EVs诱导的BMSCs和RAW264.7细胞调控中的作用。研究发现hucMSCs能够分化为成骨细胞，脂肪细胞或软骨细胞，且CD29，CD44，CD73和CD90呈阳性表达，而CD34和CD45呈阴性表达。形态学评估揭示了hucMSC-EV的典型杯状或球形形态，直径主要在60 nm至150 nm之间，并表达CD9，CD63，CD81和TSG101。 hucMSC-EV的全身给药可通过增强骨形成，减少骨髓脂肪积聚和减少骨吸收来预防骨质疏松小鼠的骨质流失并保持骨强度。蛋白质组学分析表明，有力的促成骨蛋白CLEC11A（C型凝集素结构域家族11，成员A）在hucMSC-EV中高度富集。此外，hucMSC-EVs通过体外递送CLEC11A增强了BMSC从成脂分化向成骨分化的转变。此外，CLEC11A是hucMSC-EV对破骨细胞形成的抑制作用所必需的。我们的结果表明hucMSC-EVs通过转移CLEC11A成为骨代谢的关键调节剂，可能代表了预防和治疗骨质疏松症的潜在药物。
PS：间充质干细胞来源的细胞外囊泡具有很好的修复作用，这个已经有非常非常多报道了。间充质干细胞在体内的条件下可以诱导发育成成骨细胞，因此作者探讨了间充质干细胞来源的细胞外囊泡在骨质疏松预防和治疗中的作用。
6.Pancreatic β cell microRNA-26a alleviates type 2 diabetes by improving peripheral insulin sensitivity and preserving β cell function.
胰岛β细胞microRNA-26a通过改善外周胰岛素敏感性和保留β细胞功能来缓解2型糖尿病。
[PLoS Biol] IF=8.386 PMID：32092075
摘要：2型糖尿病（T2D）的特征是胰岛素抵抗以及胰腺β细胞衰竭。传统上认为β细胞因子可通过调节胰岛素水平而不是胰岛素敏感性来控制葡萄糖稳态。外泌体正在成为细胞间通讯的新调节剂。然而，人们对β细胞源性外泌体在代谢稳态中的作用了解甚少。在这里，我们报道β细胞中的microRNA-26a（miR-26a）不仅以自分泌方式调节胰岛素分泌和β细胞复制，而且还通过循环外泌体以旁分泌方式调节外周胰岛素敏感性。 MiR-26a在超重人群的血清外泌体中减少，并且与T2D的临床特征呈负相关。而且，miR-26a在肥胖小鼠的血清外泌体和胰岛中被下调。使用miR-26a敲入和敲除小鼠模型，我们显示β细胞中的miR-26a减轻了肥胖引起的胰岛素抵抗和高胰岛素血症。从机制上讲，β细胞中的miR-26a通过外泌体增强外周胰岛素敏感性。同时，miR-26a通过靶向胰岛素分泌和β细胞增殖的几个关键调节因子来预防高胰岛素血症。这些发现为β细胞广泛的全身功能提供了新的范例，并为T2D的治疗提供了机会。
PS：2型糖尿病是国内常见的糖尿病类型，多年前就已经有文章研究报道发现细胞外囊泡在糖尿病的进程和治疗过程中具有功能作用。这篇文章阐释了胰岛β细胞来源的囊泡中携带的miR-26a在糖尿病发展中的作用。
7.Gliomas Interact with Non-glioma Brain Cells via Extracellular Vesicles.
神经胶质瘤通过细胞外囊泡与非神经胶质瘤脑细胞相互作用。
[Cell Rep] IF=7.815 PMID：32101730
摘要：越来越多的证据表明，神经胶质瘤细胞与大脑微环境之间的信息传递可能影响脑肿瘤的生长。迄今为止，这些细胞之间已知的相互作用仅限于旁分泌因子的释放。将遗传策略与纵向实时成像相结合，我们发现单个神经胶质瘤与非神经胶质瘤细胞（包括神经胶质细胞，神经元和血管细胞）的不同集合存在信息传递情况。尽管细胞融合也起着较小的作用，核酸等物质的转移主要通过细胞外囊泡（EVs）实现。我们进一步证明，EV介导的通讯导致神经元中突触活动的增加。阻断EV释放导致体内胶质瘤生长的减少。我们的发现表明，胶质瘤细胞与非胶质瘤脑细胞之间的EV介导的相互作用改变了肿瘤的微环境，并促进了胶质瘤的发展。
PS：这篇报道主要研究了神经胶质瘤细胞与非胶质瘤细胞之间的信号通讯。研究通过遗传学策略和实时成像相结合，证实了细胞外囊泡在这一过程中发挥着重要作用。
8.Ciliary Rab28 and the BBSome negatively regulate extracellular vesicle shedding.
Rab28和BBSome负调节细胞外囊泡的脱落。
[Elife] IF=7.551 PMID：32101165
摘要：纤毛能够接收和发送信息，后者以细胞外囊泡（EVs）的形式出现。细胞外囊泡是影响细胞，组织和生物体行为的纳米级通信材料。引起纤毛EV生物发生的机制几乎是完全未知的。在这里，我们显示，与人类常染色体隐性锥状杆营养不良相关的纤毛G蛋白Rab28，以纤毛特异性方式负面调节秀丽隐杆线虫的感觉器官中的EV水平。脂化的Rab28顺序靶向纤毛和纤毛状膜分别高度依赖于BBSome和异戊二烯结合蛋白磷酸二酯酶6亚基δ（PDE6D），并且BBSome的丢失会导致过多和异位的EV产生。我们还发现EV缺陷突变体在感觉区室形态发生中显示异常。综合这些发现表明，Rab28和BBSome是在周皮膜上产生EV的关键体内调节剂，表明EV可能介导纤毛和神经胶质之间的信号传导，从而形成感觉器官区室。我们的数据还表明纤毛相关细胞外囊泡的生物发生缺陷可能会导致人类纤毛病。
PS：这是一篇发表在Elife上的基础性研究报道，主要研究了囊泡的形成调控，证实了Rab28和BBSome对EV释放的福调控作用。
9.Long noncoding RNA MRPL23-AS1 Promotes Adenoid Cystic Carcinoma Lung Metastasis.
长链非编码RNA MRPL23-AS1促进腺样囊性癌的肺转移。
[Cancer Res] IF=8.378 PMID：32098781
摘要：肺转移是影响腺样囊性癌患者长期生存的主要因素。在这里，我们研究发现，涎腺腺样囊性癌（SACC）患者中的长链非编码RNA（lncRNA）MRPL23反义RNA 1（MRPL23-AS1）高度表达并与肺转移和总体生存相关。 MRPL23-AS1通过与zeste同系物2（EZH2）增强子形成RNA-蛋白质复合物来正向调节上皮-间质转化。 MRPL23-AS1增加EZH2和H3K27me3在E-钙粘蛋白启动子区域的结合。此外，从SACC患者血浆中分离的外泌体中MRPL23-AS1水平较高，而外泌体MRPL23-AS1以“外泌体分泌”方式影响肺微血管内皮细胞。富含MRPL23-AS1的外泌体增加了微血管的通透性，并促进了体内SACC的转移。总的来说，这些发现突出了SACC肺转移的分子机制。 MRPL23-AS1可能代表生物标记物，并且是临床干预以控制这种顽固性疾病的靶标。
PS：文章研究了一个长链非编码RNA的在腺样囊性癌中的功能作用，阐释了其对肺转移的调控。很值得阅读和学习的一篇文章。目前简单的长链非编码RNA研究报道已经越来越没有新意了，而长链非编码RNA通过外泌体的传递发挥功能的报道研究还是很受欢迎的。
10.HucMSC-Derived Exosomes Mitigate the Age-Related Retardation of Fertility in Female Mice.
HucMSC衍生的外泌体减轻了雌性小鼠与年龄相关的生育迟缓。
[Mol Ther] IF=8.402 PMID：32097602
摘要：在哺乳动物中，静止的原始卵泡可作为卵巢储备。卵巢功能随着年龄的增长而下降的特征在于，位于原始卵泡内的卵母细胞的数量和质量逐渐下降。许多报告表明，间质干细胞具有在卵巢功能不全（POI）或自然衰老动物模型中恢复卵巢功能的能力。但是，其潜在机制仍不清楚。在这项研究中，使用源自人脐带间充质干细胞（HucMSC-exos）的外泌体，我们发现了外泌体在原始卵母细胞中的特异性积累。外泌体对原始卵泡的刺激作用表现为卵母细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/ mTOR信号通路的激活和肾囊移植后卵泡发育的加速。进一步的分析显示，HucMSC-exos对原始卵泡的刺激作用是通过携带功能性microRNA，例如miR-146a-5p或miR-21-5p来实现的。在老年雌性小鼠中，法氏囊内注射HucMSC-exos证明了随着卵母细胞产量的增加和卵母细胞质量的改善，生育力下降的恢复。尽管辅助生殖技术已被广泛用于治疗不孕症，但其总体成功率仍然很低，尤其是对于高龄产妇。我们建议HucMSC-exos作为减轻女性与年龄相关的生育能力下降的新方法。
PS：间充质干细胞的细胞外囊泡具有组织修复作用，这篇文章研究了这些细胞外囊泡对卵巢功能的回复作用，研究提示间充质干细胞来源的细胞外囊泡能够促进组织卵巢功能的恢复。
hzangs建立了qq实名交流群~
欢迎大家来这里聊聊天，交流交流课题。
为了保证群内部的交流信息的可靠性，避免软广告等可能影响大家科研思路的事件发生，该qq群采取实名制度。请实名入群。谢谢大家配合。QQ群号：450453711 加群验证消息请注明：姓名+单位。今天的整理就到这里。希望大家可以有所收获。大家下周见！
