目前的研究已经表明，几乎所有的细胞都会释放细胞外囊泡（EV）。生物体中，细胞外囊泡的来源是多样的，肿瘤，免疫和其他细胞都会或多或少的释放细胞外囊泡。这些细胞外囊泡能够携带介导与其他远端细胞进行细胞间通信的微小RNA和蛋白质分子。这些EV在作为疾病，预后和对治疗的反应的生物标志物和介质方面具有重要意义。然而，临床来源的样本，如血液、尿液等多是来自多种细胞类型的EV的复杂混合物，这使得研究和临床分析中几乎不可能确定特定EV群体的起源和功能，因此目前的EV研究和应用受到很大的限制。为了充分利用EV作为生物标志物，并完全解码它们在生物过程中的作用，有必要首先将它们分类为不同来源和细胞类型的亚群，并达到一定的纯度和产量。
近期，Aizea Morales-Kastresana等人在细胞外囊泡领域专业杂志Journal of Extracellular Vesicles上发表文章，介绍了团队最新开发的nanoFACS分析策略。这一策略提供了一种独特的方法来分析和分选功能性的细胞外囊泡或其他类型的纳米颗粒。这一分析策略不仅具有很高的灵敏度和稳定性，同时在分析分选中能够保留囊泡结构，保持其表面蛋白的特异性和RNA成分的活性。利用这一策略，可以使MoFlo Astrios EQ等非纳米囊泡专用的流式细胞仪用于细胞外囊泡的分析分选研究。
虽然使用流式细胞仪进行细胞的分析和分选已是十分常见的操作，但即使是最灵敏的流式细胞仪，也很难完成对EV的分析分选工作。这主要是因为大多数EV低于最低检测阈值；与系统“参考噪声”的阈值相重叠。从检测策略角度来讲，许多高灵敏度细胞分选仪是“空气喷射”系统，这意味着悬浮颗粒的物流是在空气中被激光检测的，而不是像传统的流式细胞仪那样是在流动池内完成检测。因此，所有基于激光的光学仪器都会产生低水平的非特定散射光。
使用气体喷射式的流式细胞仪，其非特异性光散射的一个突出特征来自流截距；有时被称为“衍射环”或“衍射平面”。该平面的大部分是沿着激光平面散射光。由于在流体和收集透镜之间存在阻挡条，流截距不会到达探测器。然而，从激光散射的光，以及流截距所产生的漫反射会超出散射光的平面，这些光不会被阻挡条完全阻挡或消除，因此会产生背景光学噪声。
先前已有研究描述了这种散射光在确定仪器“本底噪声”中的作用。然而，还没有研究系统的报道在小颗粒检测的背景下对背景噪声的系统评估。因此，该团队研究人员们测试了多个高灵敏度分选器，并证明在优化仪器时系统监测此背景噪声具有十分重要的指导意义。可以提高信噪比，监测仪器稳定性。由于它在每个样本数据集中均提供参考信息，因此，研究人员将此背景噪声群定义为“参考噪声”。
nanoFACS方法是该研究团队通过优化高分辨率流式细胞仪，为改善信噪比，提升检测，分析和分类EV和病毒的能力而开发的。这种方法，优化用于MoFlo Astrios-EQ （Beckman Coulter），利用一侧散射（SSC）通道上的阈值，并在单独的激光通道上获取SSC数据。本文中，研究人员1）提供了使用Astrios-EQ选择nanoFACS的阈值和分析通道的基本原理，2）提供了肿瘤和免疫细胞衍生的EV的基本nanoFACS分析，以及3）证明了nanoFACS的高保真度。分类EV和HIV，具有足够的产量和保存囊泡结构和货物（蛋白质和RNA）用于分类后功能性生物测定，证明功能的保持。
这一优化的分析策略有利于我们在现有技术条件下更好的利用高灵敏度流式细胞仪对细胞外囊泡等纳米颗粒进行更加精确地分析和阐释。这将有益于我们更深入的了解细胞外囊泡的异质性。为寻找细胞外囊泡混合体中特定的细胞外囊泡亚群，确定细胞外囊泡的来源母细胞提供强有力的工具。总之。这一策略对于细胞外囊泡的研究和应用将发挥重要作用。
参考文献：
High-fidelity detection and sorting of nanoscale vesicles in viral disease and cancer. DOI: 10.1080/20013078.2019.1597603
关于MoFlo Astrios EQ 超高速流式分选系统
2014年由贝克曼库尔特公司生命科学事业部推出，该系统是一款空气中激发的六路分选系统，采用增强的双前向角散射光检测 (eFSC) 技术（该技术为贝克曼的专利），可对直径为 200 nm 到 30 μm 的颗粒同时执行检测和分选任务。凭借可在单个装置内同时执行高速细胞分选和微颗粒检测的优势，此仪器确立了流式细胞仪新的核心标准。Astrios EQ拥有精密、精确的前向角散射光解析度和免微珠的分选设置，能够大大提高生物安全性，从而可满足各种分析需求。
