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JEV:一种利用流式荧光分选识别外泌体表面EGFR的方法

外泌体是一种40-130纳米的分泌型细胞外囊泡,目前已经被认为在细胞间通讯、疾病生物标志物和药物传递上有潜在的应用价值。然而,目前对于一个细胞分泌的外泌体的
种类、群体以及其功能却知之甚少。为了解决这个问题,需要用到高分辨率的方法。

利用市售的流式细胞仪和直接标记荧光抗体,来自范德堡大学(Vanderbilt University)医学中心的研究人员使用荧光激活囊泡分选(fluorescence-activated vesicle sorting,FAVS)来分析和分选单个的外泌体,这些外泌体首先是通过程序超速离心发从人结肠癌细胞系DiFi细胞中分离出来,然后,EGFR和外泌体标记物CD9可以通过FAVS从单个的外泌体上检测得到。此外,通过高分辨率随机光学重建显微技术(stochastic optical reconstruction microscopy,STORM)在单个的、约100nm大小的EGFR/CD9双阳性外泌体中检测到了这两个标记物。研究人员目前的证据表明,表皮生长因子受体(EGFR)的活化状态可以使用单克隆抗体(mAb)来评估DiFi细胞来源的外泌体,被称为“构象激活”的EGFR(mAb 806)。使用人抗原特异性抗体,FAVS能够检测来自异种移植DiFi肿瘤的无胸腺裸鼠的血浆中分离的外泌体中的EGFR和CD9。多色FAVS被用来从3个正常个体的人血浆来源的外泌体中同时检测出CD9、EGFR以及一种EGFR配体amphiregulin (AREG)。这些研究证实了FAVS分析和分选外泌体特定表面标记的可行性。研究人员认为,FAVS可以检测循环外泌体的EGFR和AREG,将可能会成为肠癌或其它实体瘤检测的有用工具。

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图:DiFi细胞外泌体的FAVS分选以及STORM分析

参考文献:Higginbotham JN, Zhang Q, Jeppesen DK, Scott AM, Manning HC, Ochieng J, Franklin JL, Coffey RJ. (2016) Identification and characterization of EGF receptor in individual exosomes by fluorescence-activated vesicle sorting. J Extracell Vesicles 5:29254.

原文下载链接:http://www.journalofextracellularvesicles.net/index.php/jev/article/view/29254

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