肿瘤细胞来源的细胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）与肿瘤发展密切相关，基于表面蛋白标记的EVs检测是近年来液体活检的新兴热门。然而胃癌细胞来源的EVs在单位体积样本中含量极少，目前报道的EVs检测方法在简便性和样本处理上存在一定问题，如检测步骤需要反复清洗使EVs损失，导致灵敏度低、重复性差，无法满足临床检测的需求，需要抗体捕获EVs，增加检测成本等。
近日，南京大学医学院附属鼓楼医院李智洋研究员、沈瀚教授和东南大学何农跃教授的研究团队联合在Materials today advances上发表了题为“The exploration of droplet digital branched rolling circle amplification based ultrasensitive biosensor for gastric cancer cell-derived extracellular vesicles detection”的文章（Volume 16, 2022, 100296）。研究者建立了一种免清洗数字化分支滚环扩增（BRCA，Branched rolling circle amplification）的胃癌EVs检测技术（图1），首先设计适配体发卡，使其仅在与胃癌EVs膜表面粘蛋白1（MUC1）结合的情况下，触发BRCA，产生强烈的荧光信号，为了进一步提高检测灵敏度，将BRCA与商业化数字PCR仪结合，利用微液滴包裹EVs进行反应，通过荧光微液滴计数，实现MUC1高表达EVs绝对定量。
图1 数字化分支滚环扩增技术流程图
该论文建立的免清洗数字化BRCA技术检测线性范围为0 ~ 6.4×103个/μL，最低检测限为12个/μL。该检测方法能直接用于临床血清样本检测，联合应用MUC1+ EVs和CD63+ EVs数量两个指标，检测灵敏度和特异度分别达到了82.35%和66.67%。该方法无需清洗步骤，具有简便快速、特异性和灵敏度高的优点，非常适用于临床推广，能够为胃癌的诊断和预后评估提供准确的辅助工具。
参考文献：The exploration of droplet digital branched rolling circle amplification based ultrasensitive biosensor for gastric cancer cell-derived extracellular vesicles detection, Materials Today Advances, Volume 16, 2022, 100296, https://doi.org/10.1016/j.mtadv.2022.100296.
外泌体资讯网 Materials today advances | 南京大学医学院附属鼓楼医院李智洋研究员、沈瀚教授和东南大学何农跃教授研究团队：免清洗数字化滚环扩增的胃癌来源EVs超灵敏检测技术
