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【直击AACR现场】外泌体领域大牛Thery精彩报告总结,文末附深夜福利

 

Clotilde Thery阿姨是外泌体基础功能的主要研究者,在2018年AACR年会中,她以 “Molecular and functional heterogeneity of Extracellular Vesicles: what is specific of exosomes?”为标题做了一些目前外泌体研究中很少有人认真研究的事情,主要参考文献是1 PMID: 26858453 和2 PMID: 28923825,外泌体来源细胞为DC细胞(1-5点)和乳腺癌细胞。以下主要以个人角度做了一个归纳。

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这三位外泌体领域的大神从左至右为:

外泌体研究带头人Clotilde Thery;

D Lyden主要合作者Hector Peinado;

把外泌体当做荷尔蒙看待的Muller Fabbri;

(最后这位在讲座中提到目前在夏威夷大学有phd职位提供)

1.  外泌体的离心方法主要还是2006年Thery C(后面统称阿姨)提出的差速离心法+密度梯度离心,但目前即使是超离+密度梯度离心得到的pellet是否可以称为exosomes,阿姨表示需要打上问号。

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2.  EV中包含的2k 10k离心产物与100k离心获得的所谓外泌体到底有何不同,外泌体在细胞免疫方面的作用是否具有唯一性或者说独特性,以往研究表明似乎是没有的,但针对性的实验一直缺乏。阿姨通过T细胞活化的实验进行了一点解读。主要通过区别不同的EV,和评估他们的功能。

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3.  理论上,2k产物应为细胞碎片等,10k应为MV即随机向外释放的大囊泡,100k为30-150nm的外泌体,但实际上,对三组产物进行电镜观察,发现三组互相存在,只是比例有差别而已。这里,阿姨着重提出了电镜观察的重要性,这与之前我们外泌体之家举办的讲座中重点提示的相同,参考高博士当时举的一篇文献,大家可以自行比对自己提取到的外泌体是否是外泌体。笔者在海报区看到一些外泌体TEM图片根本就不是外泌体,而是低密度、高密度脂蛋白,询问了一下基本是沉淀法试剂盒提取的。

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4.  之前的各类综述提到的外泌体标志物应该做CD63 CD81 CD9,但2k,10k,100k沉淀产物的标志物如何呢?CD63,CD9,CD81在100K沉淀中富集,但其他几个EV也有;MHCII、HSC70、Flotillin-1、Actin在所有EV中均有,GP96只存在larger EV中。那么具体Marker代表的意思如下:CD9 alone: not endosome-derived sEVs,CD63 alone: Endosome-derived sEVs and large Evs,CD9+CD63+CD81阳性=endosome-derived sEVs=exosomes。所以要想说明你提取的囊泡是exosomes或者sEV,需要CD9+CD63+CD81阳性。

 

5.  进一步,2k,10,100k的产物对T细胞活化有何不同,结论是所有EV都可以活化T细胞,但小囊泡和中等囊泡诱导成TH1型,大囊泡则是Th2型,这种差异是因为大囊泡表面富含CD40,而小囊泡与中等囊泡表面富含CD80。这篇文章已经发表参考文献2,图片我就不放了。

 

6.  接着,阿姨讲了讲乳腺癌细胞分泌的外泌体特征,使用了BT-549细胞系,发现了一个很有意思的事情,即在肿瘤细胞中100k沉淀产物与DC细胞的100k沉淀产物有很大不同,CD9,CD63,Syntenin都在外泌体中高度富集,而其他EV均没有。更重要的是,乳腺癌细胞来源EV对免疫细胞分泌炎症因子的效果不同,也进行了检测,在各类炎症因子的分泌中,外泌体的刺激效果是最明显的。这与外泌体的尺寸、内容物这个物质基础存在必然联系。以上或许是肿瘤外泌体研究的最佳消息了!即肿瘤外泌体与免疫细胞外泌体的内容物分布不同,具有特异性。(本条结论对应结果图阿姨不让放)

 

7.  同时阿姨必然提到另外一位大神D Lyden的近期研究成果,她没有很明确表示支持或反对这种分类方法,但提到外泌体亚型的不同功能非常值得关注,这可能是今后外泌体高分文章的重要趋势。当然区分外泌体不同亚型的方法,目前只有D Lyden报道的不对称流场分离方法。笔者向周围专家询问这种技术的可能性,一位德国的教授表示他们那已经购买了这个仪器,准备开展相关工作了,不得不感慨科研环境的不同造成的速度差异。

 

8.  最后Thery C大神对目前外泌体研究的火爆非常欣喜,表示大家有机会可以去欧洲参加ISEV的年会,笔者毕竟还是肿瘤研究者,没有机会去欣赏了,若论坛内有大神去,欢迎交流分享。

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后记:2018年AACR汇集了全球各路肿瘤研究者与交叉学科研究,用饕餮大餐来形容不为过,一方面欣慰在世界的另一头有人和自己做着一样的事情,另一方面又体会到一阵一阵的压力,之前在讲座中提到的一些外泌体讨论,东亚国家的研究者的海报中基本已经涉及了,时不我待。在公司会展区域,看到的最多是的各种PDX模型,有最传统的PDX瘤块,也有CSC分离后接种,甚至单个CTC细胞的PDX模型;另外,各种单细胞测序技术同台竞技,多色免疫荧光,3D,4D多色标记,甚至lable-free的成像技术,在将来不知哪支会成为主流技术呢。

最后,哪国的研究者都不容易啊,无论是貌若天仙的PHD女神,还是白发苍苍的资深研究员,只有文章才代表了你的深度与厚度。当然,最羡慕的还是那些美国医生,一边发Nature一边赚大钱。

 

附上一下芝加哥的风景照,祝各位外泌体之家的朋友身体健康,工作顺利。

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芝加哥著名游客打卡处

 

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芝加哥Me Line

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芝加哥天际线,作为美国空气不是很好的芝加哥,空气真好

 

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会场餐之一,又贵又难吃

 

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网红餐厅“紫色猪”的猪肩肉和大鱿鱼须,据同行者说要排队1小时以上,笔者作为一位经常日夜颠倒吃饭不规律的外科医生,选择在下午2点半去吃没有排一秒钟队。

 

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又一网红餐厅,厚底披萨,怎么说呢?就是笔者回国后看到披萨就想吐

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